根据FDA现有的生物制品框架，CAR-T细胞作为基因治疗产品受到监管。CAR-T细胞的开发、生产、测试和临床评估都具有挑战性。仔细设计、适当测试CAR基因和载体对产品的安全性、特异性的影响这些方面都很重要。CAR-T细胞生产涉及多种生物材料和复杂的多步骤程序，这些都是产品批次之间差异的潜在来源。因此，对生产过程的控制以及批次放行测试对于确保CAR-T细胞产品的安全、质量和批次间的一致性至关重要。
近期FDA发布了关于基因疗法指导原则的草案，此草案中针对就研发、生产和控制（CMC）、药理学和毒理学以及临床研究设计提供了针对CAR-T细胞的建议，同时关于自体或同种异体CAR-T细胞等方面也做了建议。此草案虽然专门针对CAR-T细胞，同样试用于其他淋巴细胞产品，如TCR修饰的T细胞。
CAR-T细胞设计和开发
A、 CAR
a、 抗原识别允许T细胞与一个或多个目标抗原结合。建议研发者评估每个结构特异性结合其目标抗原的能力。
b、 抗原识别源于小鼠单克隆抗体，这些抗体可能对人类具有免疫原性，导致CAR-T细胞具备排斥或其他安全风险（例如过敏反应）。如果使用降低免疫原性的方法，建议IND描述这些变化及其对靶结合和生物活性的影响。
c、 信号传导启动T细胞活化。建议彻底演示信令域的功能。
B、 载体
a、 对于CAR-T细胞而言，载体是一种关键成分，可为疾病治疗提供药理活性。与非整合载体相比，整合到细胞DNA中的载体（例如，基于逆转录病毒的载体或转座子）可以提供长期外源基因表达。建议对包含整合载体的产品进行长期跟踪，因为整合载体可能会增加延迟不良事件的风险。
b、 允许在生产期间增添额外功能，例如：改变T细胞持久性、活性或者允许选择性体内消融CAR-T细胞（“自杀基因”），每个额外功能都可能影响CAR-T细胞的安全性和有效性。建议提供理由和相关数据，以支持这些功能。理由应包括评估这些额外功能对CAR-T细胞特异性、功能性、免疫原性或安全性的任何影响。
C、 细胞原料
a、 生产CAR-T细胞的起始材料通常通过患者（自体产品）或健康捐赠者（同种异体产品）的白细胞分离获得。自体和异体产品的安全性和监管考虑各不相同。
b、 如果自体T细胞临床研究分为接受过CAR-T细胞的患者和没有接受过CAR-T细胞的患者，则应在临床研究设计中评估和考虑CAR-T细胞的潜在差异。还应考虑是否有患者仍有资格接受额外的辅助治疗，如化疗或全身辐射。建议在提交IND之前，与OTAT讨论产品特性、测试、给药和临床研究设计的考虑因素。
D、 新鲜或冷冻保存的最终产品
a、 在产品质量下降之前，新鲜CAR-T细胞的保质期有限。建议通过稳定性的研究确定从配方到输液的最长时间。因此，实施流程至关重要，其中可能包括：批量放行的取样和测试时间；报告批次放行的质量控制（QC）结果和质量保证（QA）审查；安排产品运输；以及在临床现场接收和处理新鲜产品。
b、 冷冻保存为试验提供了充足的时间，并为安排患者输液提供了灵活性。建议运送到临床现场进行给药时进行CAR-T细胞冷冻保存。
c、 对于冷冻保存的CAR-T细胞，应评估冷冻保护剂的相关风险，无论是哪种配方，都应该有适当的程序来确保运送到临床现场的过程中可以对CAR-T细胞进行充分的控制。这些程序应在IND中描述，在开始临床研究之前实现，并在获得许可证之前进行验证。
CMC
A、 载体制造和测试
a、 在开始临床研究之前，应充分描述载体的特征。必须根据CGMP标准制造载体，并且必须验证分析。在CAR-T细胞生物制品许可证申请（BLA）审查期间，载体制造设施将接受检查。
b、 仅将外源基因表达作为效价的衡量标准可能足以支持早期IND研究，建议测定载体浓度，该浓度可用于维持载体数量正常化。例如，建议在合适的细胞系或供体细胞中检测载体每毫升（mL）的转导单位。
c、 载体安全性测试应包括微生物测试，如无菌、支原体、内毒素和外源性试剂测试，以确保CAR-T细胞不会受损。根据载体的类型，建议进行额外的检测。
B、 起始材料的收集、处理和测试
a、 从收集到制造之前，处理白细胞分离所用的程序，应该参考GT-CMC指南的第二部分（参考文献3）。该说明包括分离步骤和冷冻保存流程。建议在所有白细胞收集、分离地点实施这些流程。
b、 应制定适当的程序，充分控制白细胞分离的各种因素，例如：温度控制，并提供运输设备和温度监测的信息。许可证包括运输过程、任何保存或冷冻步骤的验证和稳定性的评估。
c、 通过建立白细胞分离的验收标准，可以提高生产成功率。例如，规定最小细胞数、活率和CD3+细胞百分比。白细胞分离起始材料的附加特性（例如，CD4+和CD8+T细胞、NK细胞、单核细胞、B细胞的百分比和绝对数量）可能会影响CAR-T细胞的制造过程，因为这些特性可能会影响T细胞的选择和扩增以及最终的CAR-T细胞质量。
d、 自体白细胞分离不需要捐赠者资格确定、筛查或测试。必须记录从收集到CAR-T细胞管理的材料标签。此外，建议标签至少包括两个唯一标识符。COI还应保存在临床现场，并在床边进行两次独立的患者和标签检查。
C、 CAR-T细胞的制造和测试
1、CAR-T细胞生产部分
a、CAR-T细胞制造是一个复杂的过程，应根据特定目的进行定制。GT-CMC指南（参考文献3）中说明了制造体外修饰细胞（包括CAR-T细胞）的建议。建议考虑GT-CMC指南（参考文献3）中的建议。
b、CAR-T细胞的制造需要专门的辅助材料，包括激活试剂、抗体、细胞因子、血清和生长因子。根据来源或供应商等因素，此类材料的安全性和质量可能存在很大差异。例如，建议人类或动物源性材料不要来自可能存在病毒和传染性海绵状脑病（TSE）病原体污染的地理区域，并建议对材料进行适当的外源性检测。试剂批次的可变性和稳定性也可能存在问题。建议通过供应商资格认证和来料资格认证，包括检疫、质量检测证书（COA）和原产地证书（COO）评估、目视检查和测试（视情况而定），对辅助材料的质量、安全性和效力进行认证。
c、 为确保产品安全，CAR-T细胞应无污染微生物。在当前良好生产规范（CGMP）条件下，应使用经验证的无菌工艺进行生产。使用无菌测试或适当的合格和验证测试方法，进一步支持产品安全性。
d、 不要求特定的制造设备。制造设备（如离心/清洗、选择或孵化设备，包括自动化设备）的适用性应通过在所选操作模式和特定设置的鉴定。应验证制造设备的运行参数，以支持BLA。
e、 在整个制造过程中，应确定CPP，将其用于建立过程中控制。例如：
f、 制造中适当测试至关重要。CAR-T细胞的制造过程中通常评估多个参数（例如，活率、细胞数量、细胞表型、CAR表达）。
g、 建议对CAR-T细胞进行稳定性研究。如用新鲜的CAR-T细胞，建议提供最终配方和给药间隔等信息。由健康供体制成的产品可能无法准确反映自体CAR-T细胞的稳定性，因此建议将患者材料制成的产品纳入稳定性研究。
下期将对针对CAR-T细胞生产的细胞分析、变更管理、临床前建议和临床建议这几个部分来进行解读。有兴趣的小伙伴可通过原文进行详细的了解。
