在生物学实验中,细胞计数是必不可少的一个重要环节。而血球计数板则是一种常用的细胞计数工具。
血球计数板的构造
血球计数板由优质厚玻璃制成,有4个凹槽口,中间部分被“H”型凹槽分为上下两个相同的计数平台。
血球计数板又分为汤麦式和希利格式。
汤麦式:大方格内分为25中方格,每一中方格又分为16小格即25×16型。
希利格式:大方格内分为16中方格,每一中方格又分为25小格即16×25 型。
血球计数板计数原理
血球计数板整个网格区域分为9个大方格,其中四角及中间大方格为我们的计数区域,我们根据大方格中小方格数将血球计数板计数区分成两种:黄色区域和蓝色区域,两个区域计数体积相等。蓝色和黄色计数区,长宽都是1mm,盖玻片覆盖在计数池上方形成0.1mm 深度的空间,计数体积为1mm*1mm*0.1mm=1/104ml
细胞浓度=cell/ml=测量区域细胞个数/测量区域体积×稀释倍数=测量区域细胞个数×104×稀释倍数。
血球计数原则
01根据细胞密度判断
1)如果密度比较小,可以计数蓝色区域大方格;
2)如果细胞密度适中,可以计数蓝色区域16个大方格中的一个;
3)如果细胞密度非常小,则计数黄色区域25方格中的较小方格;
但是无论选择哪种方式计数,每个方格中至少有20-50个细胞来计数,密度过低,误差较大;而细胞密度过高,往往会更容易造成操作者疲劳,增加出错概率。故建议每个方格中最多计数100个左右细胞为宜。
02根据细胞大小进行判断
1)10μm以上的细胞选择蓝色区域;
2)10μm以下的细胞选择黄色区域计数。
这主要跟计数区域面积及显微镜放大倍数有关。10μm以下的细胞需要切换高倍物镜才能看清细胞形态,而高倍物镜下面无法显示大方格完整区域,故选用25格计数区域中较小方格更好。
血球计数板的优缺点
优点
1)在显微镜下直接进行测定,操作方便快捷,且仪器损耗较小。
2)“眼见为实”,让科研人员较为准确了解自己的细胞状态。
3)成本低,没有耗材成本。
缺点
1)受人为因素较多,取样面积较小,可能发生的随机误差较大。精准度一般,重复性较低。
2)一次细胞计数时间较长。“伤眼睛”,不适合多样本、连续计数。
3)针对复杂样本,会容易将杂质计算在内。
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